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1. 铅锌矿区土壤真菌响应重金属污染的群落组成变化
杨金水, 杨扬, 孙良明, 刘伟杰, 曾远, 邓春萍, 邢冠岚, 袁红莉
北京大学学报自然科学版    2017, 53 (2): 387-396.   DOI: 10.13209/j.0479-8023.2016.122
摘要928)   HTML17)    PDF(pc) (2817KB)(304)    收藏

为研究土壤真菌适应不同程度重金属污染的群落组成变化, 以云南省勐糯铅锌矿区土壤样品为研究对象, 通过对其重金属含量和理化性质聚类分析, 选取 5 个重金属高污染和 4 个低污染样品为代表, 提取土壤样品总DNA, 利用Illumina MiSeq测序技术对其进行测序分析, 并在门、纲、目、科、属、种水平上, 分析比较真菌的群落组成变化。研究结果表明, 在高浓度重金属污染样品中, 未被分类真菌占绝对优势, 其次是Aspergillus, Un--s-Clavulinaceae sp.及Un--s-fungal sp. ARIZ L453等。污染低的样品中未被分类真菌也含有较高丰度, 但低于高污染样品, 其次是 Geastrum, AspergillusMortierella 等。利用代表性差异分析技术(RDA)分析重金属对土壤真菌多样性的影响, 发现Pb含量对微生物群落结构具有极显著影响。研究结果可为寻找表征重金属污染程度的“核心微生物”奠定一定的理论及实验基础。

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2. 小球藻Chlorella variabilis NC64A二酰甘油酰基转移酶基因的克隆表达与功能研究
杨金水, 高全秀, 李兆胜, 邢冠岚, 袁红莉
北京大学学报(自然科学版)    2016, 52 (2): 187-192.   DOI: 10.13209/j.0479-8023.2015.148
摘要1340)   HTML    PDF(pc) (3607KB)(1183)    收藏

为了揭示二酰甘油酰基转移酶(DGAT)在小球藻油脂合成过程中的作用, 对单细胞小球藻Chlorell avariabilis NC64A 的二酰甘油酰基转移酶进行原核克隆表达及功能初步研究。结果表明, 其编码序列为894bp, 编码 297 个氨基酸, 表达蛋白的表观分子量为 33 kDa, pI 9.48。保守结构域分析表明, 该蛋白属于Lysophospholipid acyltransferases (LPLATs)超家族, 具有二酰甘油酰基转移酶活性, 序列位点H68, L71, F76, R94, I97 和GAA (144?146)组成特定的酰基受体结合口袋, 能够结合酰基?酰基载体蛋白(ACP)或者酰基辅酶A上的酰基, 催化三酰甘油合成的最后一步。表达蛋白与SsPDAT 和AtPDAT 的序列相似性分别为32%和24%, 表明该蛋白可能具有磷脂酰甘油酰基转移酶(PDAT)活性, 能利用磷脂上的酰基合成三酰甘油。因此, 采用薄层层析方法以L-α-磷脂酰胆碱和 1,2-二油酰-sn-甘油为底物, 检测到其确实具有PDAT 活性, 表明限氮条件下NC64A 中DGAT 的PDAT 活性可能促进了膜脂降解耦合三酰甘油的合成。

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3. 假单孢菌PKE117木素过氧化物酶的酶学性质及基因克隆
杨金水,袁红莉,李宝珍,倪晋仁
北京大学学报(自然科学版)   
摘要746)      收藏
对纯化得到的假单孢菌PKE117的胞外木素过氧化物酶的酶学性质进行了初步研究,发现其最适pH为5.0,最适温度为30 ℃,以藜芦醇为底物,在25 ℃,pH3.0的琥珀酸钠缓冲液中与底物反应时的 K m值为(0.277±0.000 8) mmol/L,vmax为(0.049±0.001) mmol?mg-1 protein?min-1。根据LiP已知保守序列设计引物,提取质粒,扩增得到一条199 bp的DNA片段lip1和一条563 bp的DNA片段lip2,序列比对结果显示与已报道的白腐真菌过氧化物酶基因的同源性不是很高。核苷酸翻译后的氨基酸序列比对结果发现, LiP1与 Pycnoporus sanguineus的漆酶的同源性达到100%,与Mycobacterium bovis 的木素过氧化物酶的同源性达到80%;LiP2与 Arabidopsis thaliana 的过氧化物酶同源性达到100%,与 Hordeum vulgare 的过氧化物酶1同源性为75%。
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4. 斜卧青霉P6木素过氧化物酶的褐煤降解活性及cDNA克隆
杨金水,袁红莉,陈文新
北京大学学报(自然科学版)   
摘要605)      收藏
对纯化得到的斜卧青霉P6分泌的木素过氧化物酶的褐煤降解活性进行了研究,发现纯酶的褐煤降解活性依赖于 H2O2 的激活。降解后产物中小分子黄腐酸含量显著提高,褐煤及降解产物的经验分子式分别为 C100H86.5O36.5N2.09 和 C100H103.9O48.6N11.4,降解产物比原褐煤具有更高的 H、O、N 含量,而 C 含量明显下降。并且降解产物可提高豌豆种子的发芽率并明显缩短发芽时间。根据 N 末端氨基酸序列设计特异性引物,利用 RT-PCR 方法扩增得到一条约 2000 bp 的 cDNA 片段,序列测定的大小为 1956 bp,通过序列比对,与已报道的 Piloderma croceum 菌的 mnp2 基因具有 45% 的同源性,具有过氧化氢酶的保守氨基酸残基。
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